NộI Dung
- Bộ đệm hoạt động như thế nào
- Yêu cầu của bộ đệm
- Chọn một bộ đệm phù hợp
- Làm thế nào để thay đổi độ pH của bộ đệm
- Ví dụ về bộ đệm sinh học
Trong các tế bào và các sinh vật sống, các chất lỏng xung quanh và bên trong các tế bào được giữ ở độ pH không đổi. Độ pH trong hệ thống này thường rất quan trọng đối với các phản ứng sinh hóa xảy ra trong cơ thể sinh vật. Để nghiên cứu các quá trình sinh học trong phòng thí nghiệm, các nhà khoa học sử dụng bộ đệm để duy trì độ pH chính xác trong quá trình thí nghiệm. Nhiều bộ đệm sinh học ban đầu được mô tả bởi Good và các đồng nghiệp vào năm 1966 và ngày nay vẫn được sử dụng trong các phòng thí nghiệm.
Bộ đệm hoạt động như thế nào
Một bộ đệm chỉ đơn giản là một giải pháp có chứa một axit yếu và cơ sở liên hợp của nó. Khi một axit được thêm vào bộ đệm, nó sẽ phản ứng với bazơ liên hợp tạo ra một axit yếu và hầu như không ảnh hưởng đến độ pH của dung dịch.
Yêu cầu của bộ đệm
Một số đặc điểm làm cho một bộ đệm sinh học có hiệu quả. Chúng nên hòa tan trong nước, nhưng không hòa tan hoặc hòa tan tối thiểu trong dung môi hữu cơ. Bộ đệm không thể đi qua màng tế bào, vì điều này có thể ảnh hưởng đến hành vi của tế bào. Bộ đệm phải không độc hại, không nên hấp thụ bức xạ UV và nên trơ và ổn định trong suốt quá trình thí nghiệm. Nhiệt độ và thành phần ion không được thay đổi pH hoặc khả năng đệm.
Chọn một bộ đệm phù hợp
Bộ đệm được chọn phải có pKa trong phạm vi tối ưu cho quá trình nghiên cứu. Một bộ đệm có pKa cao hơn là phù hợp nếu có khả năng tăng pH trong quá trình thí nghiệm và ngược lại nếu độ pH dự kiến sẽ giảm. Nồng độ đệm nên được tối ưu hóa, vì nồng độ cao hơn 25mM có thể có khả năng đệm tốt hơn nhưng có thể ức chế các hoạt động của tế bào như enzyme. Phương thức này cũng ra lệnh sử dụng bộ đệm nào; ví dụ, trong điện di, một bộ đệm có cường độ ion thấp là thích hợp để ngăn chặn ma trận gel nóng lên.
Làm thế nào để thay đổi độ pH của bộ đệm
Vì pH có thể thay đổi khi thay đổi nhiệt độ, các nhà khoa học nên kiểm tra độ pH của chất đệm ở nhiệt độ mà tại đó chúng sẽ tiến hành thí nghiệm. Tris là một bộ đệm đặc biệt dễ bị thay đổi độ pH theo nhiệt độ. Tất cả các máy đo pH nên được hiệu chuẩn ở nhiệt độ làm việc. Phụ gia cũng có thể thay đổi độ pH, làm cho việc kiểm tra lại là cần thiết. Để thay đổi pH, một axit, thường là axit clohydric, hoặc bazơ, thường là natri hoặc kali hydroxit, được thêm vào; điều này nên được thực hiện từ từ để ngăn chặn sự bất hoạt hoặc thay đổi hóa học trong bộ đệm.
Ví dụ về bộ đệm sinh học
Bộ đệm TE, là 10 mM Tris · HCl và 1 mM EDTA, phù hợp ở một số giá trị pH để lưu trữ axit nucleic. Điện di là một phương pháp phổ biến để nghiên cứu protein hoặc axit nucleic; quá trình này sử dụng một số bộ đệm, bao gồm cả bộ đệm Tris-acetate-EDTA, Tris-glycine và Tris-bISE-EDTA. Những bộ đệm này ngăn chặn sự nóng lên của ma trận gel và có thể chứa các chất phụ gia như urê và SDS, tùy thuộc vào cuộc điều tra.