NộI Dung
- Ethylenediaminetetraacetate để tinh chế DNA
- Magneisum Clorua để khuếch đại DNA
- Ethidium Bromide cho nhuộm DNA
Việc phân tích DNA liên quan đến các loại thí nghiệm phân tử và quy trình sinh học khác nhau. DNA là một nguyên liệu thô dễ vỡ và phức tạp, vì vậy việc xử lý và phân tích nó đòi hỏi chất lượng tốt nhất và chuẩn bị hóa chất tinh khiết nhất. Tùy thuộc vào phân tích, hàng trăm hóa chất, từ dung dịch axit và cơ bản đến chất đệm và thuốc nhuộm, được tham gia vào nghiên cứu DNA. Hiểu lý do tại sao một số hóa chất được sử dụng là chìa khóa để thực hiện các thí nghiệm thành công và thu được kết quả chính xác, đáng tin cậy và có thể tái sản xuất.
Ethylenediaminetetraacetate để tinh chế DNA
Ba loại DNA được tinh chế cho công việc khoa học: DNA từ bộ gen (DNA bộ gen), toàn bộ DNA từ tế bào (DNA tổng số) hoặc từ plasmid, có thể tự nhân lên. Tinh lọc DNA tế bào tổng thể sử dụng các hóa chất cho phép phá hủy một tế bào nhiều màng trong quá trình ly giải tế bào. Ethylenediaminetetraacetate hóa học (EDTA) thường được sử dụng để lấy đi các ion magiê, cần thiết để duy trì độ cứng của thành tế bào, khiến chúng suy yếu đến mức chúng sụp đổ hoặc xé rách, giải phóng nội dung tế bào và DNA để phân tích. Ngoài ra, EDTA bảo vệ và bảo tồn tính toàn vẹn của DNA bằng cách ức chế các enzyme thường có trong tế bào, có thể phân mảnh DNA và khiến nó không sử dụng được.
Magneisum Clorua để khuếch đại DNA
Phản ứng chuỗi polymerase (PCR) là một phương pháp phân tích tinh vi được sử dụng để khuếch đại vài nghìn bản sao của phân tử DNA, tuy nhiên, nó có nhiều vấn đề kỹ thuật và không chính xác. Do đó, nhiều nhà khoa học thường xuyên thực hiện một số bộ PCR khác nhau để tìm ra điều kiện và thông số tối ưu nhất cho một gen quan tâm cụ thể. Một hóa chất được sử dụng để thực hiện tối ưu hóa như vậy là magiê, giúp ổn định enzyme DNA polymerase được sử dụng trong PCR và hoạt động như một yếu tố cần thiết cho hoạt động của enzyme. Đối với PCR, magiê được sử dụng ở dạng đệm magiê clorua.
Ethidium Bromide cho nhuộm DNA
Ethidium bromide là thuốc nhuộm liên kết với DNA bằng cách trượt vào giữa các nucleotide tạo nên chuỗi xoắn kép DNA trong một quá trình được gọi là xen kẽ. Thuốc nhuộm này sau đó có thể được chiếu sáng bằng đèn cực tím, do đó DNA mà ethidium bromide đã được liên kết có thể được nhìn thấy. Tuy nhiên, ít nhất 1 nanogram DNA là cần thiết để ethidium bromide được nhìn thấy đúng cách, do đó, đây là một cách để phát hiện DNA khuếch đại PCR. Mặc dù rẻ tiền và được sử dụng rộng rãi, nó cũng là một hóa chất gây đột biến được biết là gây ung thư, vì vậy việc sử dụng nó trong các phòng thí nghiệm được quy định cao và nhiều nhà khoa học đang chuyển sang sử dụng các chất thay thế ít độc hại hơn.