NộI Dung
Một trong những cách cổ điển để xác định nồng độ vi khuẩn trong mẫu là pha loãng mẫu, phát triển vi khuẩn trên đĩa và đếm khuẩn lạc. Các vi khuẩn mạ phát triển từ một đơn vị hình thành thuộc địa bao gồm một hoặc nhiều tế bào thành thuộc địa hữu hình có thể nhìn thấy và đếm được. Vi khuẩn là vi khuẩn phổ biến nhất để đánh giá bằng cách sử dụng số lượng tấm. Số lượng khuẩn lạc được sử dụng để phát hiện và đếm vi khuẩn trong đất, nước và thực phẩm. Các giao thức để đếm các thuộc địa nhấn mạnh một cách tiếp cận chính xác và có phương pháp.
Pha loãng mẫu, mạ và ủ
Nếu bạn chỉ đơn giản là bôi một mẫu vi khuẩn trên đĩa thạch, bạn sẽ thấy rất nhiều đơn vị hình thành khuẩn lạc mà các khuẩn lạc riêng lẻ sẽ hòa trộn với nhau, khiến chúng không thể đếm được. Để giải quyết vấn đề này, trộn mẫu vào môi trường lỏng, lấy một lượng nhỏ hỗn hợp đó và pha loãng thêm. Lặp lại quá trình này sáu đến 10 lần. Rải dung dịch pha loãng cuối cùng lên đĩa thạch và ủ trong bốn đến bảy ngày trước khi bạn đếm khuẩn lạc.
Đếm bằng tay
Thủ thuật chính trong việc đếm các thuộc địa là đếm từng chấm thuộc địa một lần. Một cách tiếp cận là đặt đĩa Petri trên nền lưới và đếm các khuẩn lạc trong mỗi ô lưới, di chuyển theo mô hình phương pháp thông qua tất cả các ô. Đánh dấu các khuẩn lạc được đếm ở mặt sau của đĩa Petri cũng có thể là một cách tiếp cận hữu ích. Nói chung, bạn sẽ cần phải đếm ít nhất ba tấm; chỉ sử dụng các tấm chứa 30 đến 300 khuẩn lạc để tạo ra các kết luận mạnh mẽ, gợi ý Mạng vi sinh, một công ty cung cấp dịch vụ tư vấn cho các phòng thí nghiệm và nhà sản xuất. Các tấm có các khuẩn lạc quá nhiều để đếm hoặc có quá ít khuẩn lạc cần được mạ lại từ một độ pha loãng mới.
Đếm tự động
Lỗi của con người thêm vào thời gian liên quan đến việc đếm các khuẩn lạc bằng tay. Để cải thiện cả độ chính xác và hiệu quả, hãy đặt đĩa Petri vào thiết bị đếm khuẩn lạc tự động. Các quầy thuộc địa tự động lấy hình ảnh của món ăn, tách các khuẩn lạc ra khỏi nền và sau đó sử dụng thuật toán để đếm các khuẩn lạc trên đĩa. Các thuật toán có thể gặp khó khăn trong việc phân biệt các thuộc địa khi hai hoặc nhiều thuộc địa chạm vào các cạnh, vì vậy đây là một lĩnh vực phát triển phần mềm đang diễn ra.
Làm cho đếm nhiều phức tạp hơn
Độ chính xác của việc tính mật độ vi khuẩn từ số lượng khuẩn lạc có một số hạn chế. Các đơn vị hình thành khuẩn lạc có thể là một tế bào đơn, một chuỗi các tế bào hoặc toàn bộ một nhóm các tế bào. Giả định là một thuộc địa đại diện cho một tế bào, do đó nồng độ được tính từ số lượng khuẩn lạc có thể thấp. Các vi khuẩn khác nhau cần các điều kiện tăng trưởng khác nhau và các khuẩn lạc trên đĩa chỉ đại diện cho các vi khuẩn phát triển mạnh trên môi trường phát triển đó trong các điều kiện ủ bệnh đó. Ngoài ra, đếm khuẩn lạc không ghi nhận các tế bào chết, một cân nhắc quan trọng khi bạn cần nồng độ của các tế bào trong mẫu ban đầu.