NộI Dung
Western blarks là một trong những thủ tục phổ biến nhất trong phòng thí nghiệm sinh hóa. Về cơ bản, nó tách protein khỏi mẫu theo kích thước, sau đó kiểm tra bằng cách sử dụng kháng thể để xác định xem có protein nào không. Nó hữu ích không chỉ trong nghiên cứu mà còn trong phòng thí nghiệm y tế hoặc chẩn đoán; các xét nghiệm cho cả bệnh HIV và Lyme, ví dụ, liên quan đến xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên quan đến enzyme (ELISA), sau đó là xét nghiệm Western blot nếu xét nghiệm ELISA dương tính. Mặc dù phổ biến, tuy nhiên, phương Tây làm mờ có một số nhược điểm.
Không chất lượng
Blots cổ điển phương Tây là không chất lượng. Nói cách khác, trong khi họ có thể cho các nhà nghiên cứu biết liệu một loại protein cụ thể có mặt hay không, họ không thể định lượng được lượng protein có mặt. Một số công ty công nghệ sinh học hiện bán bộ dụng cụ cho phép các nhà nghiên cứu hoặc kỹ thuật viên phòng thí nghiệm định lượng lượng protein hiện có bằng một đường cong tiêu chuẩn - nhưng điều này chỉ hoạt động nếu có sẵn các mẫu tinh khiết của cùng loại protein. Hơn nữa, trọng lượng phân tử của một protein chỉ có thể được ước tính bằng phương pháp làm mờ phương Tây, chứ không phải được xác định chính xác như với phép đo phổ khối.
Kháng thể
Một blot phương Tây chỉ có thể được thực hiện nếu các kháng thể chính chống lại protein quan tâm có sẵn. Mặc dù kháng thể cho nhiều loại protein khác nhau có sẵn từ các công ty công nghệ sinh học, nhưng chúng không hề rẻ; nếu các kháng thể chính không có sẵn cho một loại protein nhất định, thì sẽ không thể thực hiện một blot phương Tây tìm kiếm loại protein cụ thể đó. Hơn nữa, các nhà nghiên cứu có thể muốn xác định xem một protein đã bị biến đổi theo một cách nào đó - nếu nó đã bị phosphoryl hóa (có nhóm phốt gắn vào nó), ví dụ - và với kỹ thuật Western blot, họ cần các kháng thể đặc hiệu cho biến đổi chất đạm.
Đào tạo
Nó có thể là thử thách để thực hiện một blot phương Tây đúng cách và có được kết quả tốt, vì vậy nhân viên phải được đào tạo tốt.Trong điều này cũng như nhiều thứ khác, kinh nghiệm có lẽ là gia sư tốt nhất; ngay cả đối với một kỹ thuật viên có kinh nghiệm, tuy nhiên, một blot phương Tây là tốn thời gian. Ví dụ, phần điện di gel của thí nghiệm thường sẽ mất từ một đến hai giờ để chạy. Các tác vụ khác có thể được thực hiện trong khi gel đang chạy, tất nhiên, nhưng thử nghiệm vẫn mất khá nhiều thời gian để có kết quả.
Những hạn chế khác
Kháng thể đôi khi có thể biểu hiện một số ràng buộc ngoài mục tiêu, có thể làm cho kết quả kém hơn. Hơn nữa, với phương pháp làm mờ phương Tây, bạn sử dụng một kháng thể chống lại một loại protein cụ thể, vì vậy kết quả của bạn sẽ chỉ cho bạn biết nếu protein đó có mặt. Ngược lại, khối phổ có độ phân giải cao cho thấy tất cả các protein có trong một mẫu, và không giống như phương pháp làm mờ cổ điển phương Tây, nó là định lượng. Tất nhiên, điều quan trọng cần nhớ là phép đo khối phổ đắt hơn nhiều và cũng khó sử dụng hơn về mặt kỹ thuật so với phương pháp làm mờ phương Tây.