NộI Dung
Tính toán tiêu chuẩn cho virus là một cách phức tạp để nói rằng một nhà khoa học đang đếm số lượng virus trong một mẫu cụ thể. Để tính toán chuẩn độ vi-rút, các nhà khoa học lây nhiễm các đĩa vi khuẩn đang phát triển bằng các dung dịch vi-rút ở các nồng độ khác nhau và tìm ra số lượng vi-rút trong dung dịch ban đầu bằng cách đếm vi khuẩn đã chết do nhiễm vi-rút.
Pha loãng nối tiếp
Đeo găng tay, đổ đầy 10 ống nuôi cấy với 9 ml nước dùng và dán nhãn cho họ Cách 10 ^ -1, Ngày mai 10 ^ -2,, 10, 10, -vv, và cứ thế cho đến khi 10 10 -10. sẽ được sử dụng để pha loãng nối tiếp virus được sử dụng để tính toán hiệu ứng phage. Vì virus có thể phát triển đến nồng độ cực kỳ cao, bạn cần pha loãng chúng để đếm chúng một cách hiệu quả. Mỗi ống đại diện cho sự pha loãng gấp mười lần của virus.
Lấy 1 ml môi trường nuôi cấy virus mà bạn muốn tính toán tiêu chuẩn phage cho và chuyển nó vào ống có tiêu đề Cách 10 ^ -1 Hồi bằng pipet. Trộn đều ống. Đây là pha loãng mười lần đầu tiên của bạn.
Lấy 1 ml môi trường nuôi cấy hỗn hợp từ ống của bạn có nhãn là 10 10 -1 -1 và chuyển nó bằng pipet mới sang ống tiếp theo, cũng được dán nhãn là 10 10 -2 -2.
Tiếp tục mô hình này để tạo ra một loạt pha loãng nối tiếp. Bạn sẽ kết thúc với 9 ống 9 ml và 1 ống 10 ml. Tải lượng virus trong các ống của bạn sẽ được pha loãng ở bất cứ đâu từ 10 lần (ống đầu tiên của bạn) hoặc 100 lần (ống thứ hai) đến mười tỷ lần (ống cuối cùng của bạn).
Chuẩn bị tấm để tính tiêu chuẩn
Lấy 10 ống thạch mềm tryptone và 10 đĩa Petri và dán nhãn chúng tương ứng với các ống pha loãng nối tiếp của bạn.
Nới lỏng các nắp để chúng không bị tắt trong hơi nóng và sau đó đặt các ống thạch của bạn vào cốc nước sôi. Điều này sẽ làm tan chảy thạch để bạn có thể đổ nó vào đĩa Petri.
Chuyển ống của bạn vào bồn nước nóng ở nhiệt độ tối thiểu 45 độ C. Điều này sẽ đảm bảo rằng agar của bạn không đông cứng trong các ống trước khi bạn có cơ hội đổ nó vào đĩa Petri.
Thêm hai giọt nuôi cấy vi khuẩn vào môi trường thạch của bạn và trộn nhẹ nhàng. Đây là những vi khuẩn sẽ bị tiêu diệt, cho phép bạn đếm số lượng hạt vi rút trong một giải pháp cụ thể.
Thêm 1 ml mỗi độ pha loãng nối tiếp vào ống thạch tương ứng của nó trong khi các ống vẫn còn trong bể nước nóng. Ví dụ: 1 ml dung dịch pha loãng nối tiếp 10 ^ -1 của bạn sẽ đi vào ống thạch có nhãn là 10 ^ -1.
Trộn từng ống rồi đổ từng ống vào đĩa Petri với nhãn tương ứng. Điều này sẽ tạo ra một lớp thạch mỏng đã được cấy vi khuẩn và virus trong mỗi đĩa. Để các đĩa phát triển qua đêm trong một lò ấp.
Đếm và tính toán virus
Lấy đĩa của bạn ra khỏi lồng ấp và kiểm tra chúng. Bạn sẽ thấy các khu vực nhiều mây trên khắp các mảng nơi vi khuẩn đã phát triển, ngoại trừ các đốm nhỏ rõ ràng được gọi là mảng bám. Những mảng bám này là những mảng vi khuẩn chết và mỗi mảng bám tượng trưng cho một loại virus.
Tìm một tấm có từ 30 đến 300 mảng và đếm số mảng chính xác trên tấm đó.
Lấy số mảng trong đĩa của bạn và nhân với 10. Nếu bạn đếm được 157 mảng, bạn sẽ nhận được 1570.
Nhân số mà bạn có trong bước trước với số nghịch đảo của số trên ống pha loãng của bạn. Ví dụ: nếu tấm bạn chọn là tấm 10 ^ -5, bạn sẽ nhân 1570 với 10 ^ 5 để có 157000000. Số cuối cùng này là số hiệu của phage của bạn và đại diện cho số lượng virus trên mỗi ml văn hóa ban đầu của bạn.