NộI Dung
Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là một kỹ thuật phòng thí nghiệm được sử dụng để tách và xác định các hợp chất. Đây là một loại sắc ký cột dựa vào các cực khác nhau của các hợp chất trong một dung dịch để tách chúng ra. HPLC khác với sắc ký cột tiêu chuẩn vì nó sử dụng áp lực để buộc dung dịch đi qua cột nhanh hơn và do đó tạo ra kết quả nhanh hơn và đôi khi chính xác hơn. Mục tiêu là tách các hợp chất trong cột và để chúng thoát riêng.
Coelulation
Do tốc độ của HPLC và nó phụ thuộc vào các phân cực khác nhau của các hợp chất, hai hợp chất có cấu trúc và phân cực tương tự có thể thoát khỏi thiết bị sắc ký cùng một lúc hoặc gần như cùng một lúc. Điều này được gọi là coelulation. Coelulation làm cho việc xác định chính xác phần nào của hỗn hợp rửa giải tại thời điểm khó khăn.
Hợp chất hấp phụ
HPLC thường sử dụng một cột thủy tinh chứa đầy các hạt làm bằng các vật liệu khác nhau. Các hỗn hợp được buộc qua cột có các hóa chất liên kết với các cường độ khác nhau với các hạt. Độ bền của liên kết, phụ thuộc vào độ tương tự về độ phân cực, xác định thời gian hóa chất sẽ liên kết với hạt trước khi được giải phóng. Một số hợp chất liên kết mạnh đến mức về cơ bản chúng không bao giờ được giải phóng khỏi các hạt trong cột và không bao giờ được đo trong dung dịch thoát khỏi cột.
Giá cả
Các kỹ thuật tách phòng thí nghiệm điển hình liên quan đến việc phát triển một xét nghiệm, hoặc phương pháp tách, và sau đó thực hiện xét nghiệm đó để tách các hợp chất riêng lẻ ra khỏi dung dịch. Tuy nhiên, điều này thường dẫn đến nhiều giải pháp cũng cần phải trải qua các thủ tục, dẫn đến sự gia tăng theo cấp số nhân về độ phức tạp. Mặc dù HPLC thường có thể đơn giản hóa và tăng tốc quá trình này, chi phí phát triển bộ máy HPLC có thể trở nên rất lớn. Phát triển một bộ máy HPLC, mặc dù hiệu quả hơn nhiều, tốn kém hơn nhiều so với việc phát triển các thử nghiệm khác để tách các hợp chất. Điều này làm cho nó không có khả năng tài chính cho nhiều phòng thí nghiệm tư nhân nhỏ.
Phức tạp
HPLC không chỉ được sử dụng để tách các hợp chất đơn giản, nó còn được sử dụng để tách các protein cụ thể ra khỏi hỗn hợp tế bào. Trong trường hợp này, các hạt trong cột thường được phủ một kháng thể đặc hiệu với protein bạn cần thu thập. Các protein liên kết các kháng thể và dung dịch còn lại được truyền qua cột, sau đó các protein được giải phóng bằng một giải pháp khác và được thu thập. Điều này đòi hỏi một kỹ thuật viên có tay nghề cao để giám sát cột mọi lúc và đảm bảo rằng quy trình đang chạy chính xác như kế hoạch.