NộI Dung
Các nhà khoa học sử dụng pha loãng nối tiếp (một loạt các pha loãng 1:10) để tính mật độ dân số của nuôi cấy vi khuẩn. Khi một giọt nuôi cấy chứa một số lượng nhỏ vi khuẩn được mạ và ủ, mỗi tế bào về mặt lý thuyết sẽ đủ xa các tế bào khác mà nó sẽ tạo thành thuộc địa của riêng mình. (Trong thực tế, một số khuẩn lạc có thể là hậu duệ của hai tế bào gần đó, nhưng điều này hiếm khi xảy ra trong môi trường nuôi cấy loãng, và vì vậy số lượng khuẩn lạc là một ước tính rất tốt về số lượng tế bào ban đầu được chuyển vào đĩa.) Bởi vì mật độ dân số là không biết, một loạt các pha loãng phải được sử dụng để kết thúc với một đĩa với số lượng khuẩn lạc thích hợp.
Pha loãng nối tiếp
Dán nhãn sáu ống nghiệm (mỗi ống chứa 9 mL môi trường tăng trưởng) từ 1 đến 6. Dán nhãn sáu đĩa thạch từ 1 đến 6. Sử dụng đầu pipet và ống vô trùng 1 ml (ml) để truyền 1 ml môi trường nuôi cấy vi khuẩn vào ống 1.
Trộn đều và chuyển 1 mL từ ống 1 sang ống 2 bằng cách sử dụng pipet và vô trùng 1 ml.
Lặp lại Bước 2 cho các ống còn lại, mỗi lần chuyển 1 mL từ ống được sử dụng gần đây nhất sang ống tiếp theo.
Sử dụng một pipetter và mẹo 0,1 mL vô trùng để chuyển 0,1 mL từ ống 1 sang đĩa thạch. Đốt một que thủy tinh hình chữ L và sử dụng nó để trải đều giọt xung quanh đĩa. Ủ ấm đĩa trong 48 giờ ở nhiệt độ thích hợp cho vi khuẩn được sử dụng. Các loại vi khuẩn khác nhau có nhiệt độ tăng trưởng tối ưu khác nhau. Nếu bạn không thể tìm thấy nhiệt độ tăng trưởng tối ưu bằng vật liệu tham khảo, hãy thử ủ các tấm ở 25 và 37 độ.
Lặp lại Bước 4, mỗi lần chuyển chất lỏng từ một ống nghiệm khác nhau vào tấm tương ứng.
Tính toán dân số
Quan sát sáu tấm và chọn một tấm có 30 đến 200 khuẩn lạc biệt lập.
Nhân số lượng khuẩn lạc trên đĩa với 10 để tính số lượng tế bào trên mỗi ml nuôi cấy từ ống pha loãng được sử dụng.
Nhân số lượng từ Bước 2 với 10 ^ (số tấm) để tính số lượng tế bào trên mỗi ml nuôi cấy ban đầu. Giá trị của 10 ^ (số tấm) là hệ số pha loãng của nền văn hóa được sử dụng để làm sạch tấm đó.