NộI Dung
- Làm thế nào Gel điện di hoạt động
- Một thủ tục điện di cơ bản
- Xác định độ dài của các mảnh không xác định
Khi nói đến việc đo chiều dài của các đoạn DNA nhỏ hơn nhiều so với tế bào, các nhà vi trùng học cần một mẹo nhỏ và thuận tiện nhất là điện di trên gel. Phương pháp này dựa trên thực tế là các đoạn DNA được tích điện và nó là phương pháp thay thế cho các phương pháp đắt tiền hơn, chẳng hạn như tinh thể học tia X, chịu trách nhiệm phát hiện cấu trúc xoắn kép của DNA.
Làm thế nào Gel điện di hoạt động
Bởi vì các phân tử DNA được tích điện, chúng bị ảnh hưởng bởi một dòng điện. Khi bạn đặt chúng trong một gel trung tính và đặt một dòng điện trên gel, các phân tử sẽ di chuyển về phía điện cực dương (cực dương). Do các phân tử DNA có kích thước khác nhau mang cùng điện tích, nên các phân tử nhỏ di chuyển nhanh hơn, do đó quá trình này phân tách các phân tử thành các dải có thể so sánh với các mẫu có kích thước đã biết.
Một thủ tục điện di cơ bản
Gel thường được làm từ agarose, một loại polysacarit mà khi đun nóng trong dung dịch đệm tạo thành một loại gel bán rắn, hơi xốp. Ở một đầu, gel tạo thành các vết lõm nhỏ gọi là giếng nơi nhà nghiên cứu đặt các mẫu DNA đang nghiên cứu, cùng với các mẫu tham chiếu có chiều dài đã biết, được gọi là thang DNA. Độ dài của các mảnh thang đã được xác định trước bằng một phương pháp khác, chẳng hạn như tinh thể học tia X.
Khi gel được ngâm trong dung dịch dẫn điện và điện áp được đặt vào, các mảnh vỡ bắt đầu di chuyển qua gel - những cái nhỏ hơn trước và lớn hơn, chậm hơn phía sau. Cuối cùng, chúng tự hình thành các dải giống như quang phổ theo kích thước.
Một khi điều này xảy ra, nhà nghiên cứu tắt nguồn, truyền gel bằng thuốc nhuộm gắn DVA và kiểm tra các mẫu vật dưới ánh sáng cực tím. Sử dụng thang làm tài liệu tham khảo, nhà nghiên cứu có thể xác định kích thước của từng mảnh trong một dải nhìn thấy được. Chỉ có các dải được nhìn thấy - các đoạn DNA riêng lẻ quá nhỏ để nhìn thấy.
Xác định độ dài của các mảnh không xác định
Cơ hội không phải là tất cả các dải trong một mẫu kết hợp với một dải trên thang, vì vậy để xác định kích thước của các mảnh không xác định này, các nhà khoa học thường vẽ đồ thị. Trên trục x là khoảng cách di chuyển của mỗi dải trong bậc thang tính bằng milimét, trong khi trên trục y là kích thước của mỗi dải. Khi các điểm được kết nối bằng một đường cong, kích thước của bất kỳ dải nào có thể được ngoại suy từ đường cong sau khi đo khoảng cách mà dải đó đi được tính bằng milimét.