NộI Dung
Sắc ký lỏng hiệu năng cao là một kỹ thuật để phân tích phòng thí nghiệm hỗn hợp. Đây là một loại sắc ký hiệu quả sử dụng áp suất cao, thay vì chỉ đơn giản là trọng lực, để đẩy một mẫu hỗn hợp qua một cột. Một mẫu được bơm, sau đó một bơm chứa một lượng áp suất cao giúp di chuyển mẫu dọc theo cột được đóng gói, nơi nó được tách thành các thành phần riêng lẻ. Sự phân tách này sau đó được phân tích bởi một máy dò để mang lại kết quả.
Trang web tiêm
Để được tiêm vào HPLC, trước tiên phải hòa tan một mẫu trong dung môi lỏng, tốt nhất là một mẫu có phổ HPLC đã biết để có thể phân biệt dữ liệu của nó với các mẫu. Dung dịch lỏng chứa mẫu được đặt trong thiết bị và được gửi vào cột. Vị trí thực tế của vị trí tiêm phụ thuộc vào thương hiệu dụng cụ. Trong hầu hết các trường hợp, quy trình tiêm được tự động hóa, nhưng trong một số trường hợp, nhân viên phòng thí nghiệm phải tiêm mẫu bằng kim tiêm nhỏ.
Thành phần bơm
Thành phần bơm của đơn vị HPLC là cần thiết bởi vì nó cung cấp áp lực đẩy mẫu qua cột. Cường độ bơm khác nhau, nhưng một động cơ mạnh có thể tạo ra áp suất lên tới 6.000 psi, hoặc pound mỗi inch vuông, được áp dụng sau khi mẫu được bơm. Điều này cho phép mẫu đi qua cột nhanh hơn và hiệu quả hơn so với khi nó nhỏ giọt thông qua chỉ sử dụng lực hấp dẫn.
Mô tả cột
Tốc độ tăng của một mẫu được truyền qua cột bằng máy bơm cho phép sử dụng một loại cột khác so với sử dụng trong sắc ký lỏng đơn giản. Vật liệu đóng gói trong cột có thể có kích thước hạt nhỏ hơn nhiều, làm tăng diện tích bề mặt và do đó hỗ trợ tương tác của mẫu với cột. Hầu hết các cột HPLC hoạt động thông qua cực. Mẫu được hòa tan trong dung môi phân cực và cột được tạo thành từ các hydrocacbon không phân cực. Các phần cực của phân tử mẫu đi qua cột rất nhanh vì chúng chủ yếu tương tác với dung môi, trong khi các thành phần không phân cực mẫu nằm trong cột, tạo thành tương tác yếu với các thành phần cột. Do đó, các thành phần mẫu đi ra khỏi cột theo thứ tự từ hầu hết cực đến không cực.
Chức năng dò
Các máy dò cũng thay đổi dựa trên loại dụng cụ HPLC đang được sử dụng. Tuy nhiên, hầu hết các chức năng trong cùng một cách cơ bản. Một nguồn ánh sáng cực tím chiếu vào các thành phần mẫu riêng biệt khi chúng đi ra khỏi cột. Hầu hết các hợp chất hữu cơ hấp thụ một lượng ánh sáng nhất định, vì vậy khi chúng đi qua chùm ánh sáng được áp dụng, một máy dò có thể nhận được lượng ánh sáng được hấp thụ. Máy dò cũng ghi lại thời gian lưu giữ các thành phần dựa trên thứ tự mà chúng đi ra khỏi cột. Đầu ra này sau đó có thể được phân tích dựa trên diện tích pic để xác định tính chất chính xác của các thành phần mẫu.