NộI Dung
Nước canh dinh dưỡng lỏng được sử dụng để nuôi cấy vi khuẩn như Escherichia coli. Bí quyết cho nước dùng này khác nhau tùy thuộc vào loài vi khuẩn và sự hiện diện của biến đổi gen, ví dụ, kháng kháng sinh. Nước dùng có thể được đông cứng bằng cách thêm agar, cho phép vi khuẩn hình thành các khuẩn lạc riêng biệt, trong khi đó trong môi trường nuôi cấy lỏng, chúng chỉ đơn giản phân tán trong toàn bộ thể tích. Đây là một kỹ thuật cơ bản nhưng cần thiết cho các phương pháp tiên tiến như nhân bản gen hoặc xét nghiệm vi sinh. Bài viết này giả định rằng các chủng Escherichia coli tiêu chuẩn trong phòng thí nghiệm sẽ được nuôi cấy trên đĩa thạch Luria broth (LB) (hoặc đĩa petri).
Cân 10 gram tryptone cấp vi khuẩn, 5 gram chiết xuất men, 5 gram natri clorua, 15 gram agarose hoặc agarose và 1 ml natri hydroxit 1N. Trộn chúng với một thể tích nước vô trùng được chưng cất và hấp khử trùng cho đến khi thu được 1 lít môi trường. Hấp trên phương tiện truyền thông trong các chai hoặc bình có nắp đậy lỏng lẻo trong 25 phút. Để nguội đến khoảng 50 độ C trước khi thêm thuốc thử sẽ bị phá hủy ở nhiệt độ cao, chẳng hạn như thuốc kháng sinh hoặc các chất bổ sung dinh dưỡng khác.
Để môi trường được hấp khử trùng nguội đến 50 độ C và không thấp hơn 45 độ C, vì môi trường thạch sẽ được đặt trong thùng chứa trước khi có thể đổ. Lấy đĩa petri vô trùng và đổ đủ để phủ toàn bộ diện tích bề mặt của đĩa và ít nhất một nửa độ sâu của nó. Tránh đổ đầy các đĩa và tốt nhất là không cho thạch tiếp xúc với cạnh trên của món ăn. Cho phép các tấm được hóa cứng trong môi trường vô trùng (ví dụ: dưới mui xe dòng chảy tầng) bằng cách để nắp đậy và vào một góc của mui xe.
Lau khô đĩa. Mặc dù các tấm có thể được sử dụng ngay khi chúng được đặt, một số hơi ẩm sẽ có mặt trên bề mặt thạch, điều này sẽ ngăn chặn các khuẩn lạc vi khuẩn bám đầy đủ. Do đó, tốt nhất là làm khô các tấm trước khi áp dụng bất kỳ vi khuẩn nào, ví dụ bằng cách để chúng ở ngoài nhiệt độ phòng trong vài ngày hoặc trong nửa giờ dưới tủ hút dòng chảy hoặc trong tủ ấm 37 độ C.
Lưu trữ các tấm. Các tấm khô phải được xếp chồng lên nhau (đảo ngược) trên nắp của chúng và trở lại bao bì ban đầu, dán kín và bọc trong giấy bạc để tránh ánh sáng hoặc trong hộp đựng thích hợp. Luôn ghi ngày chuẩn bị lên các tấm và tránh sử dụng nếu các tấm hơn 2 tháng tuổi.