NộI Dung
Vi khuẩn được trồng trong đĩa Petri trên môi trường rắn gọi là môi trường thạch vi khuẩn, nơi hình thành khuẩn lạc hình tròn. Không giống như một tế bào vi khuẩn riêng lẻ, thuộc địa là một nhóm vi khuẩn đủ lớn để có thể nhìn thấy bằng mắt thường. Sự tăng trưởng của vi khuẩn có thể được đo lường bằng cách quan sát đơn giản xem có bao nhiêu khuẩn lạc; tuy nhiên, các phương pháp định lượng hơn bao gồm việc sử dụng buồng đếm, hoặc thường xuyên hơn, đếm tấm khả thi. Loại thứ hai được sử dụng thường xuyên nhất vì nó cũng cung cấp thông tin định tính như ảnh hưởng của các điều kiện tăng trưởng khác nhau. Vì có thể có hàng tỷ vi khuẩn trong đĩa petri, trước tiên, việc đo lường đòi hỏi phải pha loãng mẫu để có thể đếm số lượng khuẩn lạc.
Trong ống nghiệm, thêm 10 microlit của môi trường nuôi cấy vi khuẩn bắt đầu vào 90 microlit của môi trường pha loãng. Đóng chặt nắp ống và xoáy nhẹ để có được hỗn hợp đồng nhất. Bây giờ mẫu là một phần mười của nồng độ ban đầu của nó.
Chuyển 10 microliter của mẫu mới này sang ống nghiệm mới chứa 90 microlit của môi trường pha loãng, trộn lại. Một lần nữa, kết quả sẽ là mẫu được pha loãng thêm - bây giờ nó sẽ là một phần trăm nồng độ ban đầu của nó. Lặp lại nhiều lần, cho đến khi mẫu ban đầu được pha loãng trong khoảng 104 và 1010 lần Đảm bảo mỗi ống được dán nhãn với độ pha loãng chính xác, ví dụ 10-1, 10-2 vân vân
Phân phối 10 microliter của pha loãng cuối cùng hoàn thành vào đĩa thạch. Sử dụng cạnh trải, phân phối dung dịch vi khuẩn trên toàn bộ bề mặt của đĩa thạch. Lặp lại điều này cho hai tấm nữa. Nó cũng phổ biến để thực hiện các bước này với các mức độ pha loãng khác để so sánh. Hãy chắc chắn để dán nhãn dưới cùng của các tấm. Thay thế nắp đậy trên mỗi đĩa và để các đĩa thạch khô trong vài phút hoặc trên băng ghế trong phòng thí nghiệm bên dưới ngọn lửa hoặc trong tủ ấm. Đặt các đĩa vào lồng ấp cần được đặt ở nhiệt độ thích hợp cho chủng vi khuẩn. Để lại trong 12 đến 16 giờ.
Các khuẩn lạc nên được nhìn thấy sau 16 giờ; tuy nhiên, một số sửa đổi di truyền có thể yêu cầu lâu hơn (ví dụ: phát triển màu sắc). Khi các khuẩn lạc có thể quan sát được, lấy các tấm ra và tìm những cái có từ 30 đến 300 khuẩn lạc. Sử dụng một điểm đánh dấu vĩnh viễn, đặt một dấu chấm ở dưới cùng của đĩa petri - cạnh bằng thạch, không phải nắp - bất cứ nơi nào có thể nhìn thấy thuộc địa thông qua môi trường thạch. Đếm từng dấu chấm. Lặp lại cho mỗi món ăn.
Để đo lượng vi khuẩn trong môi trường nuôi cấy bắt đầu cho thí nghiệm này, độ pha loãng cần phải được đảo ngược trong các tính toán, ở hai nơi. Đầu tiên, khi bạn lấy một microliter từ ống nghiệm để đặt vào đĩa petri, bạn lấy một phần mười mẫu đã pha loãng, vì vậy bạn cần nhân mọi thứ với 10 để đảo ngược điều đó. Ngoài ra, nếu hệ số pha loãng trong ống nghiệm, ví dụ, 10-7 , sau đó số lượng khuẩn lạc phải được nhân với 107 để đảo ngược hiệu ứng pha loãng. Đơn giản chỉ cần loại bỏ dấu âm từ số mũ trong các tính toán. Sử dụng công thức:
× 10 × = Số đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) trên mỗi mililit văn hóa bắt đầu. Đây là sự phát triển của vi khuẩn trong các món ăn petri của bạn.