NộI Dung
- TL; DR (Quá dài; Không đọc)
- Điện di là gì?
- Chuẩn bị gel không đạt yêu cầu
- Quá nhiều mẫu
- Mẫu kém chất lượng
Bạn đã bao giờ tự hỏi làm thế nào các nhà khoa học nghiên cứu các mảnh nhỏ như DNA của bạn? Một phương pháp là điện di gel. Trong khi điện di thường tạo ra các dải rõ ràng, dễ đọc hoàn hảo để giải thích khoa học, kết quả bị mờ đôi khi làm mờ dữ liệu.
TL; DR (Quá dài; Không đọc)
Điện di gel cho phép các nhà khoa học hình dung các mẫu được tiêu hóa và đo kích thước của các mảnh. Kết quả bôi nhọ từ gel agarose được chuẩn bị không đúng cách, nạp một mẫu không pha loãng vào giếng hoặc sử dụng các mẫu chất lượng kém.
Điện di là gì?
Điện di trên gel là cách để các nhà khoa học hình dung các mẫu được phân hủy của các phân tử nhỏ như DNA và ước tính kích thước của các mảnh đó. Để thực hiện điện di, các nhà khoa học chuẩn bị một loại gel bằng cách đình chỉ agarose trong nước sôi. Sự trùng hợp kết quả tạo ra các polyme đường chéo để gel trông hơi giống mạng nhện ở cấp độ hóa học.
Các nhà khoa học sử dụng một dụng cụ cắt để tạo thành giếng trong gel để họ có thể nạp một lượng rất nhỏ các mẫu được tiêu hóa vào giếng. Bật máy làm cho dòng điện chạy qua gel và các mảnh trong mẫu bắt đầu di chuyển từ giếng sang phía bên kia của gel. Vì gel giống như web, các mảnh nhỏ di chuyển qua ma trận một cách nhanh chóng, trong khi các mảnh lớn hơn mất nhiều thời gian hơn để trèo qua ma trận. Khi hoàn thành, gel chứa các dải màu tối biểu thị khoảng cách các mảnh khác nhau đã đi. Các nhà khoa học đo các dải này và sử dụng phép tính logarit để xác định kích thước của từng mảnh dựa trên khoảng cách di chuyển của nó.
Các nhà khoa học hy vọng cho các ban nhạc rõ ràng, nhưng đôi khi các ban nhạc bôi nhọ. Sự bôi nhọ này thường là kết quả của các loại gel được chuẩn bị kém, nạp các mẫu không pha loãng vào giếng hoặc các mẫu chất lượng kém.
Chuẩn bị gel không đạt yêu cầu
Khi nói đến kết quả bôi nhọ, một thủ phạm có khả năng là một loại gel được điều chế kém. Một gel đạt yêu cầu trùng hợp đồng đều, tạo ra một ma trận đồng nhất trong suốt gel trong khay đúc. Nếu một phần của gel - thường là nửa dưới - đặt trước khi nhà khoa học hoàn thành việc đổ toàn bộ khay, gel thu được sẽ không đồng đều và mang lại kết quả mờ.
Quá nhiều mẫu
Trước khi nạp mẫu vào giếng, những mẫu đó phải đủ loãng để chạy qua gel mà không làm tràn giếng. Nếu một mẫu được nạp quá đậm đặc vì nhà khoa học quên pha loãng nó hoặc sử dụng hệ số pha loãng không phù hợp, các mảnh sẽ quá lớn cho các giếng và tạo ra vết bẩn.
Mẫu kém chất lượng
Smear cũng kết quả từ chất lượng mẫu kém. Ví dụ, một mẫu DNA bị nhiễm protein hoặc chứa quá nhiều muối có thể tạo ra vết bẩn. Các mẫu xuống cấp hoặc biến tính cũng cho kết quả kém, bao gồm cả các dải bị mờ.
Điện di gel là một cách tuyệt vời cho các nhà khoa học để hình dung các mẫu được tiêu hóa và xác định kích thước mảnh. Chuẩn bị cẩn thận cả gel và mẫu giảm thiểu khả năng bôi bẩn và mang lại các dải rõ ràng lý tưởng cho việc giải thích khoa học.