NộI Dung
DNA
Axit deoxyribonucleic và protein. DNA được tổ chức thành các đơn vị gọi là gen, mỗi gen mã hóa cho một chuỗi RNA hoặc protein cụ thể. Các gen được nghiên cứu để tìm hiểu về cấu trúc và chức năng sinh học, sự tiến hóa, bệnh tật và nhiều khía cạnh khác của hệ thống sống. Để nghiên cứu chi tiết các gen, DNA phải được phân lập và tinh chế khỏi các tế bào quan tâm.
Khai thác DNA
Mặc dù DNA từ một tế bào duy nhất có thể được trích xuất và nghiên cứu, nhưng nó không đủ để nhìn bằng mắt thường. Để có được số lượng đủ để lưu trữ, bạn càng phải làm việc với nhiều tế bào tốt hơn (nhiều triệu).
Các giao thức chính xác khác nhau đáng kể để giải thích cho các đặc điểm duy nhất của các mẫu cụ thể, nhưng các bước chung là đồng nhất hóa, ly giải, tiêu hóa, tách và thu thập. Quy trình được thực hiện tốt nhất trong một ống nhỏ (tùy thuộc vào kích thước của mẫu) thủy tinh hoặc ống nhựa.
Một mẫu thường được pha trộn hoặc tiếp đất để tách hoàn toàn các tế bào với nhau. Điều này làm cho các thành phần tế bào dễ tiếp cận hơn với các thuốc thử tiếp theo. Chất tẩy hoặc enzyme sau đó được thêm vào homogenate để tách màng tế bào (và màng nhân nếu các tế bào là sinh vật nhân chuẩn) để giải phóng DNA. Tại thời điểm này, DNA được bao quanh bởi protein, lipid, carbohydrate --- mọi thứ khác có trong các tế bào.
Một sự tiêu hóa enzyme tiếp theo có thể cần thiết để phá vỡ protein để chúng không liên kết với DNA và can thiệp vào bộ sưu tập của nó. DNA được tách ra khỏi phần còn lại của nội dung tế bào bằng cách thêm rượu, ethyl hoặc isopropyl lạnh, tinh khiết. DNA không hòa tan trong các rượu này vì vậy nó sẽ ngưng tụ để cố gắng giảm thiểu tiếp xúc với rượu. Các DNA cô đặc sau đó được thu thập, thường bằng cách ly tâm --- hoặc spooling.
Spooling DNA
Thu thập DNA bằng cách lưu trữ có hiệu quả khi một lượng lớn DNA thu được từ quy trình trích xuất. Nó cũng là một phương pháp trình diễn tuyệt vời vì có thể thấy rõ một mớ DNA tinh khiết ấn tượng.
Để spool DNA, bước tách phải được thực hiện cẩn thận. Nếu nó không phải là một phần của hỗn hợp thuốc thử ly giải được thêm vào trước đó, thì phải thêm dung dịch muối đậm đặc (natri clorua) vào dung dịch trước bước thêm rượu. Rượu lạnh được rót từ từ xuống bên cạnh ống nghiệm để tạo thành một lớp trên cùng của dung dịch nước, tránh trộn lẫn. Nếu được thực hiện chính xác, rượu sẽ tạo thành lớp riêng của nó trên đầu lớp mặn. Sau đó đến việc spooling.
Để thu thập DNA từ lớp mặn, cẩn thận đặt một que khuấy thủy tinh qua lớp cồn cho đến khi chạm vào đáy ống. Từ từ xoay thanh giữa các ngón tay, trong khi xem giao diện giữa hai lớp. Nếu có đủ DNA, nó sẽ kết tụ lại với nhau tại giao diện giữa các lớp để tạo thành một khối mờ đục. Xoay thanh để bọc DNA xung quanh nó (đó là phần spooling) và kéo nó ra khỏi ống. DNA có thể được chuyển sang một ống rượu nguyên chất khác để lưu trữ hoặc phân tích thêm.