NộI Dung
Nhuộm Gram là một quy trình nhuộm khác biệt cho thấy vi khuẩn nào là Gram dương hoặc Gram âm dựa trên màu nhuộm của chúng. Rượu Acetone là một thuốc thử được sử dụng trong quy trình này để cung cấp sự khác biệt về màu sắc. Vi khuẩn gram dương có lớp peptidoglycan dày và nhuộm màu tím, trong khi vi sinh vật gram âm có một ít hoặc không có lớp peptidoglycan và nhuộm màu hồng.
Stain-Crystal Violet chính
Sau khi chuẩn bị một mẫu vi khuẩn, pha lê tím được sử dụng để nhuộm mẫu trước. Lúc này cả vi khuẩn Gram dương và Gram âm sẽ xuất hiện màu tím. Thông thường, pha lê tím được áp dụng trên slide trong 30 giây trước khi rửa sạch mọi vết bẩn dư thừa bằng nước. Pha lê tím có thể bám dính một chút vào các lớp peptidoglycan, vì vậy không phải tất cả các vết bẩn chính sẽ được rửa sạch bằng nước.
Chất gắn-Iốt
Iốt sau đó được thêm vào mẫu trong một phút. Nó hoạt động như một chất gắn màu, phục vụ để cố định thuốc nhuộm trong quá trình nhuộm. Iốt thực hiện chức năng này bằng cách liên kết với tinh thể tím và tạo ra một phức hợp không hòa tan, bám dính tốt hơn nhiều vào lớp peptidoglycan dày có trong các tế bào vi khuẩn gram dương chứ không chỉ riêng tinh thể tím. Không có bước rửa bằng nước sau khi thêm iốt.
Rượu khử màu
Hoặc acetone hoặc rượu ethyl có thể được sử dụng làm chất khử màu. Rượu hòa tan lipit được tìm thấy trong màng tế bào bên ngoài của vi khuẩn gram âm, cho phép phức hợp tinh thể tím-iốt rò rỉ ra khỏi lớp peptidoglycan mỏng hơn. Rượu được thêm trong 10 đến 20 giây; nó được đổ trên phiến cho đến khi tất cả iốt bị cuốn trôi và dòng chảy không màu. Tại thời điểm này trong quy trình nhuộm Gram, vi khuẩn gram âm không màu trong khi vi khuẩn gram dương vẫn giữ được màu tím pha lê. Sau khi hoàn thành slide cần được rửa sạch bằng nước để ngăn chặn hiệu ứng khử màu.
Chống lại-Safranin
Safranin sau đó được thêm vào để tăng khả năng hiển thị và độ tương phản với các vi khuẩn gram âm không màu. Các vết bẩn làm cho các vi khuẩn này xuất hiện màu hồng dưới kính hiển vi. Vì vết bẩn được thêm vào toàn bộ mẫu, nó cũng nhuộm các vi khuẩn gram dương, nhưng màu tím đậm hơn che giấu màu hồng nhạt hơn của safranin. Khi mẫu trượt đã tràn ngập safranin trong khoảng một phút, nước được sử dụng để rửa sạch mọi vết bẩn dư thừa không bám vào tế bào vi khuẩn.