Trình tự logic nhất của các bước để ghép DNA ngoại lai là gì?

Posted on
Tác Giả: Lewis Jackson
Ngày Sáng TạO: 9 Có Thể 2021
CậP NhậT Ngày Tháng: 1 Tháng BảY 2024
Anonim
Trình tự logic nhất của các bước để ghép DNA ngoại lai là gì? - Khoa HọC
Trình tự logic nhất của các bước để ghép DNA ngoại lai là gì? - Khoa HọC

Cách đây không lâu, kỹ thuật di truyền là thứ của khoa học viễn tưởng - làm cho một sinh vật phát triển với các đặc điểm của một sinh vật khác. Tuy nhiên, kể từ những năm 1970, các kỹ thuật thao tác di truyền đã phát triển đến mức việc ghép DNA ngoại lai vào một sinh vật gần như là thường lệ. Ví dụ, gen kháng sâu bệnh có thể được ghép vào ngô, gen tạo insulin ở người có thể được đưa vào vi khuẩn và gen để bắt chước ung thư ở người có thể được đưa vào chuột thí nghiệm. Các chi tiết của thủ tục quá phức tạp để mô tả trong một bài viết ngắn, với nhiều tùy chọn ở mỗi bước, nhưng phác thảo khái niệm về chuỗi logic của các bước khá đơn giản.

    Ủ DNA plasmid và DNA quan tâm bằng enzyme cắt giới hạn. Enzim giới hạn sẽ phát hiện một chuỗi các cơ sở DNA cụ thể và cắt DNA ra tại thời điểm đó. Enzim hạn chế có nguồn gốc từ một số cơ chế bảo vệ vi khuẩn chống lại virus. Chúng là các phân tử sẽ bắn tỉa DNA nơi chúng phát hiện một kiểu cơ sở nhất định.

    Ủ các plasmid tách rời và các đoạn DNA bộ gen với DNA ligase. Với hầu hết các enzyme cắt giới hạn, các plasmid tròn và các đoạn DNA bộ gen sẽ có các "đầu dính" bổ sung sẽ bám vào nhau. DNA ligase sau đó sẽ kết thúc việc dán các mảnh lại với nhau. Kết quả là một loạt các plasmid tròn bao gồm các phần của DNA bộ gen.

    Chèn các plasmid vào vi khuẩn và nuôi cấy vi khuẩn để phát triển các khuẩn lạc của các sinh vật được tẩm DNA biến đổi. Nếu plasmid của bạn có gen kháng kháng sinh mà vi khuẩn chủ thiếu, bạn có thể tự động sàng lọc vi khuẩn biến đổi thành công bằng cách nuôi cấy vi khuẩn trên môi trường phát triển truyền kháng sinh. Có một số phương pháp để đưa plasmid vào vi khuẩn, chẳng hạn như sử dụng microneedle, sử dụng điện trường để mở các lỗ nhỏ trên màng vi khuẩn hoặc chỉ đưa vi khuẩn và plasmid vào cùng một dung dịch và để vi khuẩn hấp thụ chúng một cách tự nhiên.

    Các tế bào mẫu từ các thuộc địa khác nhau của vi khuẩn biến đổi. Rửa các tế bào được lấy mẫu bằng dung dịch tẩy rửa để phá vỡ màng vi khuẩn và tách DNA, sau đó làm nóng hoặc tiếp xúc với natri hydroxit để tách các sợi. Điều này phơi bày trình tự cơ sở của DNA để phân tích.

    Ủ DNA bằng đầu dò huỳnh quang. Chiếu ánh sáng cực tím vào DNA được ủ và quan sát huỳnh quang. Đầu dò bao gồm một chuỗi DNA ngắn khớp với DNA bộ gen mà bạn đã chèn. Trường hợp đầu dò khớp với DNA bạn đang tìm kiếm, nó sẽ phát sáng khi được chiếu sáng.

    Phân lập vi khuẩn từ các khuẩn lạc có chứa gen mà bạn đang tìm cách chèn. Sao chép DNA của bạn bằng cách để các khuẩn lạc vi khuẩn phát triển hoặc trích xuất DNA như bạn đã làm trước đó và sao chép nó trong máy phản ứng chuỗi polymerase.